反相高效液相色譜的原理

　　在反相液相色譜中，固定相的極性小於流動相，洗脫順序取決於溶質分子的疏水性，疏水性強的保留時間長。

　　反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合矽膠，典型的流動相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是當今液相色譜的最主要的分離模式，幾乎可用於所有能溶於極性或弱極性溶劑中的有機物的分離。 反相色譜法適於分離非極性、極性或離子型化合物，大部分的分析任務皆由反相色譜法完成。

　　1、高效液相色譜法的原理是以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測。

　　2、高效液相色譜法有“四高一廣”的特點：

　　（1）高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速透過色譜柱，必須對載液加高壓。

　　（2）高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小於1小時。

　　（3）高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

　　（4）高靈敏度：紫外檢測器可達0。01ng，進樣量在μL數量級。

　　（5）應用範圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

　　因為在你的檢測波長中有負吸收的物質，所以會出倒峰，用水做溶劑是會有倒峰，多用有機相洗柱子再看看。

　　1：你用的溶劑出峰了，但保留時間一般很小2：你的色譜系統個元器件之間的資料線正負極接反。