植物組織培養是指在無菌條件下,將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質體,培養在人工配製的培養基上,並給以適合其生長、發育的條件,使之分生出新植株的方法稱為組織培養。又稱離體培養或試管培養。其特點是:
1、取材少,培養材料經濟;
2、人為控制培養條件,不受自然條件影響;
3、生長週期短,繁殖率高;
4、管理方便,利於自動化控制。
植物組織培養是指在無菌條件下,將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質體,培養在人工配製的培養基上,並給以適合其生長、發育的條件,使之分生出新植株的方法稱為組織培養。又稱離體培養或試管培養。其特點是:
1、取材少,培養材料經濟;
2、人為控制培養條件,不受自然條件影響;
3、生長週期短,繁殖率高;
4、管理方便,利於自動化控制。
植物細胞的全能性是植物組織培養的原理。一個植物體的全部體細胞,都是從受精卵經過有絲分裂產生的。具有發育成完整個體所必需的全套遺傳物質,所以體細胞就具有形成完整植株的潛能,植物細胞的這種特性叫做全能性。
原理植物組織培養根據植物細胞具有全能性的理論,利用植物體離體的器官、組織或細胞以及原生質體,在無菌和適宜的人工培養基及溫度等人工條件下,能誘匯出愈傷組織、不定芽、不定根,最後形成完整的植株。
用植物各部分組織,如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進行培養獲得再生植株,也指在培養過程中從各器官上產生愈傷組織的培養,愈傷組織再經過再分化形成再生植物。
不過這種組織沒有發生分化,只是一團薄壁細胞,叫做愈傷組織。在適合的光照、溫度和一定的營養物質與激素等條件下,愈傷組織便開始分化。
1、將採來的植物材料除去不用的部分,將需要的部分仔細洗乾淨,如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小,即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數小時,沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料,可裝入紗布袋內沖洗。流水沖洗在汙染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗,然後再用自來水衝淨洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的汙物,除去脂質性的物質,便於滅菌液的直接接觸。當然,最理想的清洗物質是表面活性物質—吐溫。
2、對材料的表面浸潤滅菌。要在超淨臺或接種箱內完成,準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手錶等。用70%酒精浸10~30秒。由於酒精具有使植物材料表面被浸溼的作用,加之70%酒精穿透力強,也很易殺傷植物細胞,所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料,如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗,多層鱗片的休眠芽等等,以及主要取用內部的材料,則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下,待酒精蒸發後再剝除外層,取用內部材料。
3、用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多,可根據情況選取1~2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,視採用的消毒液種類,涮洗3~10次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意:酒精滲透性強,幼嫩材料易在酒精中失綠,所以浸泡時間要短,防止酒精殺死植物細胞。老熟材料,特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些,如種子可以浸泡5分鐘。昇汞的滲透力弱,一般浸泡10分鐘左右,對植物材料的殺傷力不大。漂白粉容易導致植物材料失綠,所以對於幼嫩材料要慎用。在消毒液中加入濃度為0.08~0.12%的吐溫20或80(一種溼潤劑),可以降低植物材料表面的張力,達到更好的消毒效果。