1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有出芽現象。
2、丫啶橙染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。
4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺
1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有出芽現象。
2、丫啶橙染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。
4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺
根據所處的活化階段分類、根據TCR型別分類、根據CD分子分亞群、根據功能特徵分亞群等等。T淋巴細胞來源於骨髓的多能幹細胞(胚胎期則來源於卵黃囊和肝)。
在人體胚胎期和初生期,骨髓中的一部分多能幹細胞或前T細胞遷移到胸腺內,在胸腺激素的誘導下分化成熟,成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分佈至外周免疫器官的胸腺依賴區定居,並可經淋巴管、外周血和組織液等進行再迴圈,發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再迴圈有利於廣泛接觸進入體內的抗原物質,加強免疫應答,較長期保持免疫記憶。
1、收集約106細胞,用冷PBS洗2次。
2、4%福爾馬林4℃固定10min左右後塗片,晾乾。
3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min,水衝淨,晾乾後觀察,以紫外光(340nm)激發hocchest。
4、細胞凋亡是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的啟用、表達以及調控等的作用,它並不是病理條件下,自體損傷的一種現象,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。
5、細胞凋亡有別於細胞壞死,它有一系列的細胞形態學和生物化學的改變,包括出現染色體濃縮、DNA降解、凋亡小體的形成等。在正常的活細胞中,磷脂醯絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位於細胞膜內側,但在凋亡細胞中,PS從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中,Annexin-V(膜聯蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+的依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力結合。因此將Annexin-V進行熒光素(如FITC 、PE)或生物素(biotin)標記,以標記了的膜聯蛋白-V作為探針,利用熒光顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。