為什麼反轉錄病毒需要tRNA作引物

　　因為這兩種東西的分子機制和序列都有明顯的同源性，既有可能是反轉錄轉座子在進化過程中獲得了一些蛋白質，從細胞裡脫離出來成為逆轉錄病毒；也有可能是反轉錄病毒進入細胞以後整合到基因組裡成了逆轉錄轉座子。tRNA的一些功能，可能是一種過渡形態的遺傳資訊傳遞方式的遺蹟，來自於RNA作為主要遺傳物質時的自我複製機制。一些RNA病毒的基因組末端結構，也就是tRNA的特徵，而這個結構是用於RNA病毒基因組的複製起始的。另外粉色麵包黴菌的線粒體質粒在複製過程中，要透過中介RNA完成，這個過程中的逆轉錄被一些人視為進化過程中RNA基因組複製向現在的DNA基因組複製的一個過渡形態的遺蹟。

　　普通PCR需要正反向引物各一條，即一對引物，有些特殊PCR需要多條引物。

　　pcr技術的基本原理類似於dna的自然複製過程，其特異性依賴於靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

　　pcr是一種體外dna擴增技術，它依賴於dna聚合酶在模板dna、引物和四種脫氧核苷酸存在下的酶促反應。待擴增的DNA片段及其兩側互補的寡核苷酸鏈引物透過“高溫變性-低溫退火-引物延伸”三步反覆迴圈，使DNA片段的數量成倍增加，因此在短時間內，我們需要大量的特異性基因片段。

　　在環境檢測中，靶核酸序列經常存在於細胞提取物等複雜混合物中，且含量非常低。對於檢測這種複雜群體中的特定微生物或基因，雜交是不敏感的。

　　pcr技術可以將目標序列擴增幾個數量級，然後用探針雜交檢測擴增序列，用於微生物種群結構的定性或定量分析。pcr技術常與rt-pcr、競爭pcr、巢式pcr、rapd、ardra等技術結合使用。

　　引物合成的具體實驗步驟：

　　1、脫掉附加在CPG擔體上的第一個鹼基5羥基基團上的保護基，準備附加下一個新的鹼基；

　　2、活化新的鹼基單體，準備與第一個鹼基進行反應；

　　3、第二個鹼基與第一個鹼基發生偶聯反應；

　　4、將沒有反應的第一個鹼基的5羥基加帽封死，使其不再進一步參與反應；

　　5、將核苷亞磷酸酯氧化成更穩定的核苷磷酸酯。

　　6、重複進行第一步到第五步的迴圈，直至合成完所需的Oligo DNA序列。

　　7、合成結束後，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進行進一步的純化。