1、得到大量的DNA，雖然PCR也可以，但PCR擴增有出錯率、但你每做一次常規的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反應的試劑盒又不便宜，用PCR來製備大量DNA有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於PCR），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的DNA。
2、測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。你要寫論文必須要給人真憑實據。
1、得到大量的DNA，雖然PCR也可以，但PCR擴增有出錯率、但你每做一次常規的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反應的試劑盒又不便宜，用PCR來製備大量DNA有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於PCR），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的DNA。
2、測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。你要寫論文必須要給人真憑實據。
1、首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。
2、用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端。
3、將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵。
4、再加入適量DNA連線酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是透過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合，形成重組DNA分子。
1、切割質粒和目的基因的限制酶必須是同-.種酶，以獲得相同的黏性末端，利於重組質粒的構建。插入的目的基因只是結構基因部分，其表達需要調控序列，因而用作載體的質粒的插入部位前須有啟動子，後須有終止子。
2、透過載體把目的基因片段匯入活細胞。構建基因表達載體也就是把目的基因和載體連線，使目的基因在受體細胞 ...
基因表達載體的構建，即目的基因與運載體結合，是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。
構建條件：
1、必須能夠在宿主細胞中複製，使重組基因能夠在宿主基因中複製，從而穩定儲存下來，這是作為運載 ...
1、在構建基因表達載體時要用到的工具酶有限制酶和DNA連線酶。
2、基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。
3、其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。 ...
基因表達載體的構建，即目的基因與運載體結合，是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心；
其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。 ...
操作步驟如下：
1、用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現缺口，露出黏性末端；
2、再用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端；
3、將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處；
4、再使鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵；
5、再加入適量的DNA連線酶，催化 ...
1、構建基因表達載體的原因是因為如果沒有表達載體，基因是無法進入目的細胞的，只需要記住在植入基因時構建載體即可。
2、表達載體是必須構造的，一般為質粒（小型環狀DNA）。
3、如果沒有表達載體你想要植入基因是不能實現的，先用限制性內切酶切開質粒，然後將基因插入，在用DNA連線酶連線上，記住連線酶和 ...
啟動子、RNA酶的結合部位終止子、一段有特殊結構的DNA短片段、轉錄結束的標誌目的基因、標記基因、共重組DNA的鑑定和選擇複製原點、DNA複製起點E（DNA聚合酶結合位點）。
基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩 ...