凝膠色譜法介紹

　　1、凝膠色譜法又稱為凝膠過濾法、 凝膠層析、凝膠滲透層析、通透層析、分子篩層析。

　　2、凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分技術，由於裝置簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用，不但應用於科學實驗研究，而且已經大規模地用於工業生產。

　　3、凝膠的種類及性質

　　（1）交聯葡聚糖凝膠（Sephadex）

　　交聯葡聚糖的商品名為Sephadex，不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示，G後面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如，G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克，同樣G-200克每克千膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝膠的交聯程度，膨脹程度及分部範圍。

　　（2）Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶於水及親脂溶劑，用於分離不溶於水的物質。

　　（3）瓊脂糖凝膠：

　　商品名很多，常見的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美國Bio-Rad）等。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構，網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下，它的結構是穩定的，可以在許多條件下使用（如水，pH4-9範圍內的鹽溶液）。瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化，也不能高壓消毒，可用化學滅菌處理。

　　（4）聚丙烯醯胺凝膠：

　　是一種人工合成凝膠，是以丙烯醯胺為單位， 由甲叉雙丙烯醯胺交聯成的，經乾燥粉碎或加工成形制成粒狀，控制交聯劑的用量可製成各種型號的凝膠。交聯劑越多，孔隙越小。聚丙烯醯胺凝膠的商品為生物膠－P （Bio-Gel P），由美國Bio-Rad廠生產，型號很多，從P-2至P-300共10種，P 後面的數字再乘1000就相當於該凝膠的排阻限度。

　　（5）聚苯乙烯凝膠商品為Styrogel ， 具有大網孔結構， 可用於分離分子量1600到40，000，000的生物大分子，適用於有機多聚物，分子量測定和脂溶性天然物的分級，凝膠機械強度好，洗脫劑可用甲基亞碸。

　　凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小分離蛋白質。

　　大分子物質由於直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔，而只能分佈顆粒之間，所以在洗脫時向下移動的速度較快。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外，還可以進入凝膠顆粒的微孔中，即進入凝膠相內，在向下移動的過程中，從一個凝膠內擴散到顆粒間隙後再進入另一凝膠顆粒，如此不斷地進入和擴散，小分子物質的下移速度落後於大分子物質，從而使樣品中分子大的先流出色譜柱，中等分子的後流出，分子最小的最後流出。

　　因為在你的檢測波長中有負吸收的物質，所以會出倒峰，用水做溶劑是會有倒峰，多用有機相洗柱子再看看。

　　1：你用的溶劑出峰了，但保留時間一般很小2：你的色譜系統個元器件之間的資料線正負極接反。