按兩相狀態 :氣固色譜法、氣液色譜法、液固色譜法、液液色譜法。
按固定相的幾何形式 :柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法。
按分離原理:吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法、尺寸排阻色譜法、親和色譜法。
按兩相狀態 :氣固色譜法、氣液色譜法、液固色譜法、液液色譜法。
按固定相的幾何形式 :柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法。
按分離原理:吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法、尺寸排阻色譜法、親和色譜法。
分為三類:柱色譜、紙色譜以及薄層色譜
1、柱色譜為向玻璃管中填入固定相,以流動相溶劑浸潤後在上方倒入待分離的溶液,再滴加流動相,因為待分離物質對固定相的吸附力不同,吸附力大的固著不動或移動緩慢,吸附力小的被流動相溶劑洗下來隨流動相向下流動,從而實現分離;
2、紙色譜以濾紙條為固定相,在紙條上點上待分離的混合溶液的樣點,將紙條下端浸入流動相溶劑中懸掛,溶劑因為毛細作用沿濾紙條上升,樣點中的溶質從而被分離;
3、薄層色譜是在玻璃板上塗以固定相塗層,然後點樣,下端浸入溶劑,同樣自下而上分離,常用於探索柱色譜實驗條件,溶劑和固定相的選擇等。
1、凝膠色譜法又稱為凝膠過濾法、 凝膠層析、凝膠滲透層析、通透層析、分子篩層析。
2、凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分技術,由於裝置簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用,不但應用於科學實驗研究,而且已經大規模地用於工業生產。
3、凝膠的種類及性質
(1)交聯葡聚糖凝膠(Sephadex)
交聯葡聚糖的商品名為Sephadex,不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G後面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克,同樣G-200克每克千膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因此,“G”反映,凝膠的交聯程度,膨脹程度及分部範圍。
(2)Sephadex LH-20,是Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶於水及親脂溶劑,用於分離不溶於水的物質。
(3)瓊脂糖凝膠:
商品名很多,常見的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美國Bio-Rad)等。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構,網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下,它的結構是穩定的,可以在許多條件下使用(如水,pH4-9範圍內的鹽溶液)。瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化,也不能高壓消毒,可用化學滅菌處理。
(4)聚丙烯醯胺凝膠:
是一種人工合成凝膠,是以丙烯醯胺為單位, 由甲叉雙丙烯醯胺交聯成的,經乾燥粉碎或加工成形制成粒狀,控制交聯劑的用量可製成各種型號的凝膠。交聯劑越多,孔隙越小。聚丙烯醯胺凝膠的商品為生物膠-P (Bio-Gel P),由美國Bio-Rad廠生產,型號很多,從P-2至P-300共10種,P 後面的數字再乘1000就相當於該凝膠的排阻限度。
(5)聚苯乙烯凝膠商品為Styrogel , 具有大網孔結構, 可用於分離分子量1600到40,000,000的生物大分子,適用於有機多聚物,分子量測定和脂溶性天然物的分級,凝膠機械強度好,洗脫劑可用甲基亞碸。