1、母種製作技術，一般處於儲存期的大球蓋菇菌種的菌絲處在緩慢生長或停止生產狀態，所以在製作生產用的母種前，必須對儲存的菌種進行復壯，以便將處於旺盛生長狀態的菌種接入母種或原種培養基上，促進菌絲快速生長，獲得菌絲粗壯、濃白、生長勢旺的菌種。
（1）培養基配方：I號：PDA(馬鈴薯200g、葡萄糖18g、瓊脂18g、水1000m1)。Ⅱ號：PDA+硫酸鎂1．5g+磷酸二氫鉀3g+蛋白腖2g、水1000ml。Ⅲ號：馬鈴薯100g、幹雜木屑100g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml。
上述配方的培養基經高壓20分鐘滅菌消毒後製成試管斜面，3天內用完。
（2）製作方法：透過組織分離技術，將選取的大球蓋菇組織塊接入I號培養基上(或接入需復壯的儲存種)。在24到28℃條件下經10至15天培養，菌絲長至試管1：3--1：4時，挑取菌絲擴充套件前端濃密、粗壯的部分轉入Ⅱ號或Ⅲ號培養基上，採用兩點接種法，以使菌絲迅速長滿培養基表面(一般15到20天)提高菌絲的質量。經Ⅱ號、Ⅲ號復壯培養基培養的菌絲表現為濃白、粗壯、生命力強，以利原種菌絲的生長，縮短原種培養時間，提高成品率。
2、原種及生產種製作
（1）配方：I號：小麥或大麥88％、米糠或麥麩10％、石膏或碳酸鈣1％、石灰0．5％、含水量65％(加入米糠或麩皮主要是使培養基疏鬆，增加透氣性，菌絲走向好)。Ⅱ號：小麥25％、稻草64％、麥麩10％、石膏粉1％、含水量65％--70％。Ⅲ號：雜木屑42％、雜刨木花42％、米糠或麥麩15％、硫酸鎂0．2％、石膏或碳酸鈣1％、含水量70％。
以上配方在1．3--1．5kg／平方米壓力下，消毒2--2．5小時，3天內用完。
（2）原料選擇和配製：實踐證明：製作大球蓋菇原種和生產種的培養基主原料以麥粒最好，木屑、刨木花次之，稻草最差。
（3）麥粒的選擇：應選深黃或暗紅色皮韌性大、浸泡時不易破皮的麥粒為好，從吸水率來看大麥優於小麥。
（4）浸泡：浸泡分石灰水浸泡和清水浸泡預煮後加石灰兩種方法。前者用1％石灰水浸泡，pH值9至10，在25℃小麥浸泡8至9小時，大麥浸泡9至10小時，夏季水溫高應適當縮短時間。浸泡好的小麥粒，用手指甲掐麥粒凹陷，有較強的彈性，指甲印很快消失為宜。後者用清水先浸麥粒，時間與上相同。浸好的麥粒澇起用清水沖洗後瀝乾，放入鍋內煮至剛沸為止澇起涼開，加入鋪料混合，用0．5％石灰調pH6．5左右，含水量65％。
（5）裝瓶及消毒：選用容積700ml，瓶口內徑為3cm左右的淺白色耐高溫玻璃瓶(不宜用廣口瓶，以免雜菌侵入)，將配好混勻的培養料裝入瓶中，每瓶裝200--300g為宜，在1．3至1．5kg／平方米壓力下消毒2--2．5小時，切忌消毒時間過長以免麥粒呈糊狀，導致透氣性和養分下降，影響菌絲生長。
(4)接種和培養：採取多點式接種，即在瓶內培養料四周按適當的距離接種3--4點，料面上再接小塊菌種，在24--28℃條件下，暗培養7--10天，菌絲萌發生長至直徑4cm左右的菌斑時，立刻對菌絲進行人工攪拌，攪拌時接種點的菌絲被攪斷受刺激，同時由於開瓶口(在超淨臺上進行)實際上給菌絲起增氧作用，有利於菌絲迅速生長，一般整個培養過程需25--30天可長滿瓶。
3、生產種製作：
(1)配方、培養基製作、瓶子選擇和消毒與原種相同。
(2)接種：將長滿瓶的原種接種到生產培養基表面上，儘量鋪滿料面，以免雜菌汙染，每瓶原種接不超過30瓶生產種，在24--28℃條件下培養7--10天菌絲萌發生長至潔白、濃密粗壯時，對菌絲進行人工攪拌，攪斷菌絲，刺激其快速生長，一般20--25天長滿全瓶。