原理:將細菌懸浮於含有和能消化細胞壁的溶菌酶的緩衝液中,然後加熱到使其裂解。加熱除了破壞細菌外壁,還有助於解開DNA鏈的鹼基配對,並使蛋白質和染色體DNA變性。
特徵:蛋白質的去除,主要是靠不溶解的蛋白質複合物的形成。雖然將中和後的體系置於一段時間,可以形成更多的該不溶複合物,從而使蛋白質殘留更少,但實踐證明這樣做並不是必須的除非是大量抽提。
1、取3mL菌液,8000g離心5min收集菌體;
2、加入200μL溶液I,充分震盪混勻;
3、加入400μL新配製的溶液II緩慢顛倒離心管數次以充分混勻,室溫放置5min;
4、加入300μL溶液III,混勻後,冰浴放置10min,期間搖動3次;
5、4˚C 10000g離心10min,取上清;
6、加入0.6乘體積異丙醇,混勻,室溫放置15min。10000g離心10min,棄上清,沉澱用百分之七十乙醇洗滌2次,室溫乾燥;
7、加50μL TE溶解沉澱,負20攝氏度儲存質粒。
1、具有複製起點。沒有就意味著不能複製;
2、具有標記基因。沒有就意味著你不能識別哪些是轉化子;
3、具有多克隆位點。沒有就意味著沒法插入目的基因;
4、分子量小且複製數高。沒有就意味著難以操作;
5、容易檢測其表型。沒有就意味著不知道哪些是陽性克隆。
質粒是小型環狀DNA分子,在基因工程中作為最常用,最簡單的載體。
質粒作為載體的條件有:
1、具有複製起始點。
2、具有兩種以上易被檢測的選擇性標記。
3、在選擇標記上具有多種限制酶的單一切點。
4、具有儘可能小的相對分子質量。
5、應屬於鬆弛複製型。
6、應為非傳遞性質粒理想 ...
提質增效是著力改進工作作風,提升工作能力,提高工作質量,增強工作效能,需要做到以下幾點:
1、要先學會適當的放鬆自己,讓自己能夠得到充足的休息。現在很多人都面臨來自企業、社會、家庭等各方面的壓力,重壓之下難免會影響工作效率,因此學會放鬆,使自己從壓力下解放出來,才能以輕鬆的心情積極的工作;
2、 ...
質粒可以作為遺傳工程的載體的原因簡述如下。
1、質粒能在宿主細胞中複製繁殖,且有較高的自主複製能力。
2、容易進入宿主細胞。
3、容易插入外來核酸片段,插入後不影響其進入宿主細胞和在細胞中的複製。
4、容易從宿主細胞中分離純化出來。
5、有容易被識別篩選的標誌。
不是所有的質粒都具 ...
物質氣化後以分子狀態進入質譜儀,經過燈絲髮射的電子轟擊後,形成各種不同碎片,有的失去氫,有的失去一個基團,有的成為更小的碎片,碎片進入四極杆後,四極杆透過不同電的方向變換。碎片透過四極杆時,由於碎片質量和所帶電核不同,其會隨四極杆電方向變換而改變前進方向,帶電碎片到達終點的時間不同,其方向變換也會過快或過 ...
質粒5個特點:質粒具有自我複製的能力。質粒DNA所編碼的基因產物賦予細菌某些性狀特徵。質粒可自行丟失與消除。質粒的轉移性。質粒可分為相容性與不相容性。質粒廣泛存在於生物界,從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物,甚至人類機體中都含有。從分子組成看,有DNA質粒,也有RNA質粒; 從分子構型看,有線 ...
質粒是細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體或擬核以外的能夠自主複製的環狀DNA分子。
基本特徵:
1、存在於細胞質中的遺傳物質;
2、具有自主複製能力;
3、可傳給子代;
4、可在細菌之間轉移;
5、閉合環狀的雙鏈DNA分子。 ...
質粒廣泛存在於生物界,從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物,甚至人類機體中都含有,從分子組成看,有DNA 質粒,也有RNA 質粒,從分子構型看,有線型質粒、也有環狀質粒,細菌質粒是基因工程中最常用的載體。
質粒是細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體或擬核以外的DNA分子,存在於細胞質中,具有自 ...