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體外克隆目的基因的方法

體外克隆目的基因方法

  體外克隆目的基因方法有很多,目前用於獲得目的基因的方法有幾種,如:限制性內切酶、直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等,其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應(PCR),或逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)體外擴增目的DNA片段是目前最常用的方法。將基因組DNA用限制性內切酶消化後插入到適當載體中,得到含有不同插入片段的克隆載體,這種克隆載體的混合物含有長短不同的基因組片段,這就是基因文庫。

體外克隆目的基因的方法

  相鄰片段的體外克隆目的基因法:

  (1)PanhandlePCR法:

  在限制酶消化的DNA3’端加一個與未知序列上游已知序列互補的單鏈引物,從而使經變性後產生的單鏈DNA分子內聚合,導致己知DNA定位於未知相鄰DNA側翼區段。引物設計是該技術運用的關鍵所在,所需引物包含-一個與已知序列上游互補的單鏈引物和兩對位於該單鏈引物兩側與己知序列一-致的引物。

  (2)CassettePCR法:

  利用Cassette及Casette引物特異性快速擴增cDNA及基因組DNA未知區域的一種有效方法。由於Cassette的5’端沒有磷酸基,在目標DNA的3’端和Cassette的5’端的連線部位形成缺口,在第一次PCR反應的第一迴圈時,從引物C1開始的延伸反應在連線部位終止,從而控制了非特異性的擴增。只有從引物S1開始延伸合成的DNA鏈,才能成為引物C1的模板,進行DNA的擴增反應。再用內側引物(引物C2,引物S2)進一步進行第二次PCR反應時,能高效特異性地擴增目的DNA。

克隆裝扮使用方法

  在地下城與勇士這款遊戲中,克隆裝扮的使用方法就是先裝備一件與克隆裝扮同部位的普通、高階、稀有貨神器裝扮,然後再點選克隆裝扮進行裝備。裝備克隆裝扮後,先裝備的那件裝扮的外觀會被克隆裝扮繼承,而裝扮的屬性則替換為克隆裝扮本身的屬性。

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菊的盆栽養殖方法

  1、藍目菊的生長習性。藍目菊喜歡溫暖、光照充足、土壤肥沃的環境,但是它們在土壤貧瘠、鹽分高或者乾旱的環境中也可以頑強生長。需要注意的是,不同品種的藍目菊的抗逆性差異比較大,一般來說,抗逆性比較強的藍目菊,葉片鋪展,植株匍匐,花色多表現為紫、粉、白等顏色,花心多為暗藍色。   2、藍目菊的繁殖方式。兩種繁殖 ...

菊的施肥方法

  1、基肥:說到基肥就先來說說它的土壤,養分充足的土壤也會減少養護植物的難度,可以用5%的蛭石、10%的珍珠岩、85%泥炭土,但泥炭土不要選擇太過細膩的,這樣的土壤配製非常適合栽種它們,在栽種前要新增一些肥料進去,可保小苗生長的更加健壯。   2、冬季施肥:寒冷的季節到來之前,可以提高植物的抗寒能力,輕鬆度 ...

目的基因的4種獲取方法

  1、從基因文庫中獲取目的基因;2、cDNA文庫;3、反轉錄法;4、人工合成法。目的基因,也稱靶標基因,是指在實驗中研究或操縱的特定基因。在基因克隆過程中目的基因就是要分離、純化、克隆並轉化到生物體的那個可以帶來預期表型性狀如抗蟲或耐除草劑的基因。   目的基因獲得方法是取得含有所需生物學功能或編碼所需產物 ...

獲取目的基因的常用方法是哪種

  1、從基因文庫中獲取目的基因:將含有某種生物的許多基因片段,匯入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物不同的基因,稱為基因文庫。 當需要某一片段時,根據目的基因的有關資訊,如根據基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉錄產物,以及基因的表達產物蛋白質等特性來獲取目的基因;    ...

基因定向突變的技術的方法和原理

  基因定向突變是指透過聚合酶鏈式反應等方法向目的DNA片段中引入所需變化,包括鹼基的新增、刪除、點突變等。   方法原理:基因突變定向誘變利用重組DNA技術使DNA分子在指定位置上發生特定的變化,從而收到定向的誘變效果。   定向突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表徵,是基因研究工作中一種 ...

菊的扦插養殖方法

  1、藍目菊枝條的扦插應最好在春季進行,有利於其生根發芽,最好不要在夏季扦插,會大大降低扦插成活率,影響繁殖。   2、藍目菊對於環境的適應能力較強強,具有旺盛的生命力。所以對於土壤基質要求並不高,一般來說用沙子、泥土珍珠岩等及其混合介質都可以,混合沙子主要是要保證盆土的透水性,更方便枝條生根。然後就可以在 ...