體外克隆目的基因方法有很多,目前用於獲得目的基因的方法有幾種,如:限制性內切酶、直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等,其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應(PCR),或逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)體外擴增目的DNA片段是目前最常用的方法。將基因組DNA用限制性內切酶消化後插入到適當載體中,得到含有不同插入片段的克隆載體,這種克隆載體的混合物含有長短不同的基因組片段,這就是基因文庫。
體外克隆目的基因方法有很多,目前用於獲得目的基因的方法有幾種,如:限制性內切酶、直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等,其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應(PCR),或逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)體外擴增目的DNA片段是目前最常用的方法。將基因組DNA用限制性內切酶消化後插入到適當載體中,得到含有不同插入片段的克隆載體,這種克隆載體的混合物含有長短不同的基因組片段,這就是基因文庫。
相鄰片段的體外克隆目的基因法:
(1)PanhandlePCR法:
在限制酶消化的DNA3’端加一個與未知序列上游已知序列互補的單鏈引物,從而使經變性後產生的單鏈DNA分子內聚合,導致己知DNA定位於未知相鄰DNA側翼區段。引物設計是該技術運用的關鍵所在,所需引物包含-一個與已知序列上游互補的單鏈引物和兩對位於該單鏈引物兩側與己知序列一-致的引物。
(2)CassettePCR法:
利用Cassette及Casette引物特異性快速擴增cDNA及基因組DNA未知區域的一種有效方法。由於Cassette的5’端沒有磷酸基,在目標DNA的3’端和Cassette的5’端的連線部位形成缺口,在第一次PCR反應的第一迴圈時,從引物C1開始的延伸反應在連線部位終止,從而控制了非特異性的擴增。只有從引物S1開始延伸合成的DNA鏈,才能成為引物C1的模板,進行DNA的擴增反應。再用內側引物(引物C2,引物S2)進一步進行第二次PCR反應時,能高效特異性地擴增目的DNA。
在地下城與勇士這款遊戲中,克隆裝扮的使用方法就是先裝備一件與克隆裝扮同部位的普通、高階、稀有貨神器裝扮,然後再點選克隆裝扮進行裝備。裝備克隆裝扮後,先裝備的那件裝扮的外觀會被克隆裝扮繼承,而裝扮的屬性則替換為克隆裝扮本身的屬性。
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