1、取3mL菌液，8000g離心5min收集菌體；
2、加入200μL溶液I，充分震盪混勻；
3、加入400μL新配製的溶液II緩慢顛倒離心管數次以充分混勻，室溫放置5min；
4、加入300μL溶液III，混勻後，冰浴放置10min，期間搖動3次；
5、4˚C 10000g離心10min，取上清；
6、加入0.6乘體積異丙醇，混勻，室溫放置15min。10000g離心10min，棄上清，沉澱用百分之七十乙醇洗滌2次，室溫乾燥；
7、加50μL TE溶解沉澱，負20攝氏度儲存質粒。
1、取3mL菌液，8000g離心5min收集菌體；
2、加入200μL溶液I，充分震盪混勻；
3、加入400μL新配製的溶液II緩慢顛倒離心管數次以充分混勻，室溫放置5min；
4、加入300μL溶液III，混勻後，冰浴放置10min，期間搖動3次；
5、4˚C 10000g離心10min，取上清；
6、加入0.6乘體積異丙醇，混勻，室溫放置15min。10000g離心10min，棄上清，沉澱用百分之七十乙醇洗滌2次，室溫乾燥；
7、加50μL TE溶解沉澱，負20攝氏度儲存質粒。
原理：將細菌懸浮於含有和能消化細胞壁的溶菌酶的緩衝液中，然後加熱到使其裂解。加熱除了破壞細菌外壁，還有助於解開DNA鏈的鹼基配對，並使蛋白質和染色體DNA變性。
特徵：蛋白質的去除，主要是靠不溶解的蛋白質複合物的形成。雖然將中和後的體系置於一段時間，可以形成更多的該不溶複合物，從而使蛋白質殘留更少，但實踐證明這樣做並不是必須的除非是大量抽提。
1、具有複製起點。沒有就意味著不能複製；
2、具有標記基因。沒有就意味著你不能識別哪些是轉化子；
3、具有多克隆位點。沒有就意味著沒法插入目的基因；
4、分子量小且複製數高。沒有就意味著難以操作；
5、容易檢測其表型。沒有就意味著不知道哪些是陽性克隆。