PCR合成引物OD指什麼

　　在合成引物時，公司通常要求標註合成引物的濃度，通常用OD值表示，如1OD、2OD、5OD等。

　　OD值即光密度值，DNA採用紫外吸光譜法定量，一個OD值的定義為在260奈米波長下，1毫升體積水溶液，1釐米光程，吸光度為1安。合成引物時，為了確定引物濃度，可以在260奈米波長下測量吸光度，然後使用光吸收值和微摩消光係數的倒數，透過Beers法則計算出引物濃度。通常1個OD值的合成引物DNA的質量約為33微克。

　　引物合成的具體實驗步驟：

　　1、脫掉附加在CPG擔體上的第一個鹼基5羥基基團上的保護基，準備附加下一個新的鹼基；

　　2、活化新的鹼基單體，準備與第一個鹼基進行反應；

　　3、第二個鹼基與第一個鹼基發生偶聯反應；

　　4、將沒有反應的第一個鹼基的5羥基加帽封死，使其不再進一步參與反應；

　　5、將核苷亞磷酸酯氧化成更穩定的核苷磷酸酯。

　　6、重複進行第一步到第五步的迴圈，直至合成完所需的Oligo DNA序列。

　　7、合成結束後，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進行進一步的純化。

　　原理：

　　PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列，引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。

　　原則：

　　引物應用核酸系列保守區內設計並具有特異性。產物不能形成二級結構。引物長度一般在15到30鹼基之間。G加C含量在百分之40到60之間。鹼基要隨機分佈。引物自身不能有連續4個鹼基的互補。引物之間不能有連續4個鹼基的互補。引物5撇端可以修飾。引物3撇端不可修飾。引物3撇端要避開密碼子的第3位。